www.infectology.ru
Новое:  Анизакидоз Актуально: Клещевые инфекции ISSN 1609-9877
  Главная/Новости
Поиск по сайту Поиск на сайте  
Вопросы:: Вы можете задать свой вопрос специалистам в области инфекцинных болезней и паразитологии.
Для всех:
Инфектология для всех
Новые книги
Советы путешественнику
Календарь прививок
Глистные инвазии человека New!
Мифы и легенды
Реестр специалистов
Последние новости: RSS 2.0

22.10.16 В США началась эпидемия венерических инфекций

22.10.16 В Москве количество ВИЧ-инфицированных выросло вдвое

24.10.15 В ВОЗ собираются провести пробные испытания первой вакцины от малярии на детях

28.04.14 Массовая вспышка дизентерии в Новоуткинске.

21.04.14 Обновлены требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней в России

Обучение:
Реклама:
Мультимедиа:
CD "Руководство и атлас по инфекционным и паразитарным болезням человека", 2008 год New!
Найди себе доктора!
Для студентов:
Симптомы и синдромы
Справочники и пособия
Вопросы и ответы
Для специалистов:
Компетентное мнение
Руководящие документы
Справочники и пособия
Статьи и обзоры
Авторефераты
Реестр специалистов
Визитные карточки
Синдромы и симптомы
Микроскоп от А до Я
Новые книги
Конференции
Общества
О "Вестнике..."
Сайты:

Лечение приобретенного порока сердца. Врачи мирового уровня. Доступные цены
allapinin.ru

Оглавление Лабораторная диагностика паразитарных болезней

Мочеполовой трихомониаз.

Лабораторная диагностика.

Для постановки диагноза урогенитального трихомониаза помимо клинических данных необходимо выявление Т. vaginalis. Лабораторная диагностика играет важную роль также при обследовании выздоравливающих и трихомонадоносителей. Заключение об излечении больного может быть сделано лишь на основании трехкратного исследования с отрицательным результатом. Основными методами лабораторной диагностики трихомониаза являются микроскопический и культуральный.

Микроскопический метод. У мужчин проводится микроскопическое исследование отделяемого из уретры, центрифугата свежевыпущенной мочи, тотального выжима из придаточных половых желез. При заборе материала необходимо предварительно сухой салфеткой удалить выделения (если они есть) и протереть слизистую головки полового члена тампоном, смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия. Соскоб с уретры забирают ложечкой Фолькмана с глубины 5-7 см.

У женщин исследуется отделяемое из уретры, канала шейки матки и осадок мочи. Материал берут ложечкой Фолькмана из уретры на глубине 1-3 см, а также со слизистой заднего свода влагалища и из шейки матки.

В течение суток до взятия материала на исследование женщины не должны делать спринцеваний, а мужчинам следует воздерживаться от мочеиспусканий в течение 3-4 ч до анализа.

Паразитологическая диагностика трихомониаза производится путем изучения нативных мазков, препаратов, окрашенных различными красителями и специальными методами микроскопии.

Нативный мазок. На предметное стекло наносят каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия или раствора Рингера-Локка и смешивают с ним исследуемый материал. Мазки накрывают покровным стеклом и микроскопируют немедленно после приготовления препарата (объектив 40х, окуляр 7х или 10х). В положительных случаях в мазках обнаруживаются трихомонады грушевидной, овальной или округлой формы. По величине они несколько больше лейкоцита. Для подвижных форм характерны толчкообразные движения ундулирующей мембраны и жгутиков, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным конденсором. Этих простейших необходимо дифференцировать от представителей семейства Bodonidae, имеющих 2 жгутика и очень быстро двигающихся по прямой. К ошибкам может приводить также наличие в препарате подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают иногда ложное впечатление большого количества подвижных трихомонад. При комнатной температуре в изотоническом растворе натрия хлорида трихомонады в течение 2-3 часов теряют подвижность, поэтому исследование необходимо проводить немедленно по поступлении материала.

Для лучшего выявления трихомонад целесообразно производить параллельные исследования нативных мазков и окрашенных препаратов.

Исследуемый материал равномерно наносится тонким слоем на предметные стекла. У женщин материал, взятый из уретры, равномерно размазывают на одной половине стекла в виде продольных полос, а из шейки матки - в виде круга на второй половине стекла. Затем производится окрашивание препаратов.

1. Препараты, окрашенные метиленовым синим. Мазок, высушенный на воздухе, фиксируется в течение 3 мин в 96% этиловом спирте, высушивается, затем на него на 1 мин наносится 1 % раствор метиленового синего. Оставшийся краситель смывают под струей холодной воды, мазок высушивают. При микроскопии с иммерсией (объектив 90х, окуляр 7х или 10х) наблюдаются округлой, овальной формы трихомонады, расположенные в слизи между клеточными элементами. Четко просматривается оболочка паразитов, эксцентрично расположенное ядро, интенсивно окрашенное в синий цвет; протоплазма нежная, сетчатая, светлосиняя; вакуоли бесцветные.

2. Препараты, окрашенные эозином и метиленовым синим рекомендуется приготовлять при исследовании материала, взятого у детей. Без предварительной фиксации препараты погружают в 1 % раствор зозина на 15-20 с, тщательно промывают струей холодной воды и заливают 1 % раствором метиленового синего на 1-2 мин, затем вновь промывают и высушивают. В этом препарате четко просматривается оболочка трихомонад, ядра их окрашены в синий цвет, а цитотоплазма светло-синяя с легкой сетчатостью; вакуоли бесцветные. Ядра клеток тканей окрашиваются в синий, а протоплазма - в голубой цвет разной интенсивности. Бактериальная флора имеет синий цвет.

3. Препараты, окрашенные бриллиантовым зеленым рекомендуется использовать при отсутствии метиленового синего. Препарат фиксируют в течение 3 мин в 96 % этиловом спирте, высушивают, затем на 1 мин. наносят 0,5 % водный раствор бриллиантового зеленого, тщательно смывают краситель струей холодной воды и высушивают. При микроскопии видны урогенитальные трихомонады, расположенные между клеточными элементами. Четко просматривается их оболочка, эксцентрично расположенное ядро, окрашенное в интенсивный зеленый цвет; цитоплазма сетчатая, светло-зеленого цвета, вакуоли бесцветные. Бактериальная флора окрашивается в зеленый цвет разной интенсивности.

4. Препараты, окрашенные по модифицированному способу Грама. Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают 1 % водным раствором кристаллического фиолетового на 1 мин (не должно быть пузырьков воздуха между бумагой и стеклом). Бумагу снимают, препарат промывают водопроводной водой и на несколько секунд (до почернения мазка) заливают раствором Люголя. Остаток его смывают, препарат обесцвечивают в 96 % этиловом спирте, поочередно вынимая и погружая его в спирт до тех пор, пока с тонких участков препарата перестанут стекать фиолетовые струйки и он примет бледно-серый оттенок. Затем препарат промывают водой и окрашивают в течение 3 мин 1 % водным раствором нейтрального красного. После этого препарат вновь промывают и высушивают. Правильно окрашенный препарат при просмотре под микроскопом на тонких участках имеет оранжево-красный цвет, а на толстых - лилово-фиолетовый. Ядра клеточных элементов (лейкоцитов, эпителиальных клеток) в центре имеют фиолетовый, а на периферии - оранжево-красный цвет. Высокое качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания препарата. Урогенитальные трихомонады окружены тонкой, четко видимой оболочкой, ядро их сиреневого или фиолетового цвета; протоплазма окрашена в бледный оранжево-красный цвет, с легкой сетчатостью; жгутики и ундулирующая мембрана не просматриваются.

Окрашенные препараты позволяют одновременно диагностировать гонорею и трихомониаз. При просмотре окрашенных мазков необходимо обращать внимание на скопление лейкоцитов на поверхности эпителиальных клеток как вспомогательный признак наличия трихомонад. Этот признак наблюдается довольно часто, но не учитывается врачами-лаборантами, а в руководствах по лабораторным методам исследования о нем практически не сообщается. Еще одним косвенным признаком урогенитального трихомониаза можно также считать наличие большого количества слизи в исследуемом материале.

Исследование окрашенных мазков может повышать процент выявления урогенитальных трихомонад за счет учета подвижных и неподвижных особей, в то время как при исследовании нативных препаратов неподвижные особи часто не учитываются. Если в окрашенных мазках наблюдается большое количество сегментоядерных нейтрофилов при незначительном количестве бактериальной флоры, необходимо провести исследование на хламидиоз и микоплазмоз.

5.Метод фазово-контрастной микроскопии. Дает возможность обнаруживать живых малоконтрастных урогенитальных трихомонад в неокрашенном виде. Паразиты различимы даже тогда, когда они совсем неподвижны. Метод позволяет с предельной четкостью различать не только движения, но и структуру трихомонад: жгутики, ундулирующую мембрану, аксостиль и др. Для окраски нативных препаратов при фазовоконтрастной микроскопии иногда применяется 0,1 % раствор сафронина. При этой окраске трихомонады сохраняют движения и лучше выделяются среди форменных элементов.

6.Метод люминесцентной микроскопии. Метод основан на микроскопии светящегося в ультрафиолетовых лучах объекта в темном поле. Если собственная (первичная) люминесценция материала незначительна, то применяют люминофоры (акридиновый оранжевый и др.), которые, взаимодействуя с объектом, образуют светящиеся комплексы.

Высушенный мазок, взятый для поисков трихомонад, можно длительно хранить в темном месте, а перед исследованием на него необходимо нанести несколько капель раствора акридинового оранжевого (1:40 000 в буферном растворе с рН 7). На мазок с краской накладывают покровное стекло, а избыток жидкости отсасывают фильтровальной бумагой, после чего мазок исследуют под люминесцентным микроскопом. Цитоплазма урогенитальных трихомонад обычно окрашивается в кирпично-красный цвет,а иногда - в желто-коричневый. Ядро овальной формы, светится зеленым или желто-оранжевым цветом. По размеру трихомонады крупнее лейкоцитов, но более мелкие, чем клетки плоского эпителия. При помощи люминесцентной микроскопии удается выявить неподвижные и безжгутиковые формы урогенитальных трихомонад, которые при обычном микроскопировании трудно отличить от лейкоцитов и эпителиальных клеток. Однако необходимо отметить, что у ряда больных в обычном нативном препарате обнаруживают подвижные трихомонады, в то время как при люминесцентной микроскопии они определяются с большим трудом. Сравнительные исследования не показали значительного преимущества люминесцентной микроскопии перед обычной. Тем не менее одновременное использование обоих методов улучшает диагностику трихомонадных заболеваний, особенно у мужчин. Благодаря эксцентрично расположенному зеленоватому ядру и окрашенной в кирпично-красной цвет цитоплазме трихомонад почти невозможно спутать с другими клетками.

При использовании микроскопического метода трихомонады выявляются в большинстве случаев урогенитального трихомониаза. При хронических, процессах и при трихомонадоносительстве, наряду с трихомонадами, обнаруживается разнообразная микрофлора. Необходимо принимать во внимание возможность обнаружения трихомонад в виде атипичных округлых, слабоподвижных и неподвижных форм, иногда без жгутиков и ундулирующей мембраны. У женщин в мазках со слизистой влагалища и шейки матки возможно выявление отдельных ядер трихомонад. Выявление таких ядер и атипичных форм свидетельствует о наличии урогенитального трихомониаза.

Культуральный метод. Применяется в случаях атипичной клинической картины, при хроническом течении заболевания, выявлении трихомонадоносителей и для установления выздоровления больных.

Для культивирования трихомонад используется большое количество жидких и плотных питательных сред. Из первых наиболее часто применяются среды СКДС, СГДС и 199-СДС.

Среда СКДС (среда с гидролизатом казеина, дрожжевым аутолизатом и сывороткой крови).

Состав среды:

- 100 мл солевого раствора следующего состава: натрия хлори-

да 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г,

натрия бикарбоната 0,2 г, 0,2 % раствора метиленового

синего 05 мл, дистиллированной воды до 1 л;

- 10 мл гидролизата казеина;

- 10 мл дрожжевого аутолизата;

- 30 мл сыворотки крови крупного рогатого скота без консерванта;

- 10 мл 20 % раствора мальтозы;

- пенициллина и стрептомицина по 100 000 ЕД.

При отсутствии гидролизата казеина рекомендуется использовать среду СГДС, содержащую 10 мл 5 % раствора гемогидролизата для культур тканей. Остальные ингредиенты берут в тех же количествах, как и в среде СКДС.

Среда 199-СДС (в модификации Ю.Ф.Захаркива)

Состав среды:

- 100 мл солевого раствора: натрия хлорида 6,5 г, калия хлорида 0,14 г, кальция хлорида 0,12 г, натрия бикарбона-

та 0,2 г, дистиллированной воды до 1 л;

- 20 мл сыворотки крови крупного рогатого скота без консерванта (или сыворотки эмбрионов телят);

- 20 мл среды 199 для культур тканей;

- 10 мл 20 % раствора мальтозы;

- 200 мг солянокислого цистеина;

- по 0.5 мл 5% раствора пиридоксина гидрохлорида и 6% раствора тиамина бромида;

- ампициллина 125000 ЕД и гентамицина 40000 ЕД.

Указанные среды разливают в стерильные пробирки по 5 мл, заливая их слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм. Посев производят, помещая исследуемый материал при помощи пастеровской пипетки на дно этих пробирок. Урогенитальные трихомонады на 3-5-й день после посева дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берут материал для исследования в нативном мазке. При микроскопии видны одиночные трихомонады и их скопления; у отдельных их особей отмечаются активные движения жгугиков и ундулирующей мембраны. В случае отрицательных результатов исследование повторяют на 7-9-й и 11-17-й день после посева.

Среду 199-СДС (с модификациями) целесообразно также применять при оценке чувствительности трихомонад к противопротозойным препаратам методом серийных разведений в жидкой среде. Учет результатов проводится на 3 и 5 день после посева. Для получения чистых культур урогенитальных трихомонад без применения антибиотиков рекомендуются различные плотные питательные среды. На таких средах трихомонады хорошо сохраняют свои морфологические признаки.

Серологические методы. Используются как вспомогательные, Низкая иммуногенность и наличие различных серотипов урогенитальных трихомонад затрудняют получение достоверных результатов в диагностике. Серологические реакции иногда бывают отрицательными даже в случаях, когда выявлен возбудитель. Достоинством серологического метода является то, что серологические реакции остаются положительными в течение 1 года после излечения трихомониаза, что очень важно для ретроспективной диагностики. Результаты серологических реакций зависят от степени соответствия антигенной структуры штамма, вызвавшего заболевание, и штамма, использованного для приготовления диагностической сыворотки.

Для серологической диагностики урогенитального трихомониаза используются реакции агглютинации, связывания комплемента (РСК), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и ускоренная реакция иммунофлюоресценции (РИФ-40).

В РИФ-40 в качестве антигена используют урогенитальные трихомонады из 20-30 штаммов, выращенных на жидкой питательной среде в течение 2-3 сут. После промываний готовый антиген наносится на предметные стекла, куда добавляется инактивированная испытываемая сыворотка крови, разведенная в 40 раз бессолевым мясопептонным бульоном (рН 7), приготовленным из говяжьего мяса с повышенным содержанием (1,5 %) пептона. РИФ-40 успешно применяется при диагностике бессимптомного трихомониаза, трихомонадоносительства и для определения этиологии неспецифических воспалительных заболеваний мочеполовых органов.

Микробиологический метод определения ферментативной активности трихомонад, основанный на их способности разлагать глюкозу, мальтозу, крахмал и гликоген с образованием кислоты и газа, не получил широкого распространения, поскольку ферментативная активность урогенитальных трихомонад оказалась весьма вариабельной.


© Коллектив авторов, 1998-2013, Почтовый адрес: 195009, Санкт-Петербург, а/я 16


 

Высококачественный доступ в Интернет предоставлен ГНУ "Вузтелекомцентр" и его структурным подразделением UniTel.

  ВНИМАНИЕ:  Информация, представленная на данном сайте, не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения, и не может служить заменой очной консультации врача!