www.infectology.ru
Новое:  Анизакидоз Актуально: Клещевые инфекции ISSN 1609-9877
  Главная/Новости
Поиск по сайту Поиск на сайте  
Вопросы:: Вы можете задать свой вопрос специалистам в области инфекцинных болезней и паразитологии.
Для всех:
Инфектология для всех
Новые книги
Советы путешественнику
Календарь прививок
Глистные инвазии человека New!
Мифы и легенды
Реестр специалистов
Последние новости: RSS 2.0

22.10.16 В США началась эпидемия венерических инфекций

22.10.16 В Москве количество ВИЧ-инфицированных выросло вдвое

24.10.15 В ВОЗ собираются провести пробные испытания первой вакцины от малярии на детях

28.04.14 Массовая вспышка дизентерии в Новоуткинске.

21.04.14 Обновлены требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней в России

Обучение:
Реклама:
Мультимедиа:
CD "Руководство и атлас по инфекционным и паразитарным болезням человека", 2008 год New!
Найди себе доктора!
Для студентов:
Симптомы и синдромы
Справочники и пособия
Вопросы и ответы
Для специалистов:
Компетентное мнение
Руководящие документы
Справочники и пособия
Статьи и обзоры
Авторефераты
Реестр специалистов
Визитные карточки
Синдромы и симптомы
Микроскоп от А до Я
Новые книги
Конференции
Общества
О "Вестнике..."
Сайты:


Назад

Хламидиоз. Методические рекомендации. Диагностика хламидий на культуре клеток McCoy

Одним из лучших, но в то же время наиболее трудоемким, является метод диагностики хламидийной инфекции посредством изоляции возбудителя на культуре клеток, обработанных различными антиметаболитами (Золотой стандарт). Для этой цели обычно используют культуру клеток МсСоу, обработанных циклогексамидом.

Приготовление питательных сред:

1). Ростовая среда: среда Игла без глютамина - 400 мл, 3% глютамин -5 мл, эмбриональная сыворотка теленка 4% от общего объема, гентамицин - 40 мкг/мл.

2). Изолирующая среда (среда с антибиотиками для заражения клеток клиническим материалом): среда Игла без глютамина - 400 мл, 3% глютамин -5 мл, эмбриональная сыворотка теленка 8% от общего объема, гентамицин - 40 мкг/мл, 10% глюкоза - 5 мл.

3). Транспортная среда (для забора и хранения клинического материала): фосфатный буфер с сахарозой (сахароза 48,46 г., К2НР04 (б/в) - 2,088 г., КН2Р04 (б/в) - 1,088 г. на 1 л дистиллированной воды, довести рН до 7,0). Разлить по аликвотам и автоклавировать при 115°С15 мин.

Хранить при 4° С до применения 1-2 мес.

Перед использованием к буферному раствору добавляют инактивированную нагреванием сыворотку крупного рогатого скота - 4% от общего объема, стрептомицин - 50 мкг/мл, амфотерицин В - 25 мкг/мл среды.

В качестве транспортной среды можно так же использовать ростовую среду, к 100 мл которой вносят 1 мл 5% глюкозы, и вышеуказанные антибиотики в соответствующей концентрации.

Транспортную среду стерильно разливают по 2 мл в пенициллиновые флаконы с бусинками и хранят при 20°С в течение месяца.

Инокуляция клинического материала:

Готовят раствор циклогексимида на изолирующей среде - 2 мкг/мл. В стерильные плоскодонные пробирки с помещенными в них покровными стеклами добавляют по 2 мл клеточной суспензии (1х105 клеток/мл) и ставят их на 16-24 часа в термостат при 37оС.

В пенициллиновые флаконы с транспортной средой, содержащей клинический материал, при интенсивном встряхивании добавляют 2 мл свежеприготовленной изолирующей среды. В это время из пробирок с монослоем удаляют ростовую среду, не разрушая монослоя. Затем распределить изолирующую среду из пенициллиновых флаконов с инфекционным материалом приблизительно по 2 мл в две плоскодонных пробирки с монослоем и центрифугировать их в течение часа при 3000 об/мин (2400 д) в центрифуге с горизонтальным ротором. Инкубировать в термостате при 37°С - 2 часа, затем удалить изолирующую среду и добавить по 2 мл новой порции изолирующей среды с циклогексамидом (2 мкг на мл). Материал инкубируется в термостате при 37°С 48-72 часа.

Фиксация и окраска:

Удалить среду из пробирок, не нарушая монослоя, добавить 1-2 мл метанола, осторожно по стенке, фиксировать в течение 10 мин осторожно потряхивая пробирку для ресуспензирования белкового осадка. Промыть фосфатным буфером (рН 6,8).Приготовить краску по Романовскому-Гимза на фосфатном буфере 1:10 (1 часть краски и 9 частей фосфатного буфера). Прилить по 1 мл краски в каждую пробирку, через 30-60 мин удалить ее и дифференцировать препарат 30% метанолом на фосфатном буфере. Стекла высушить. Монтировать на предметное стекло покровные стекла монослоем вниз в канадском бальзаме.

Просматривать в темнопольном микроскопе на присутствие включений при увеличении в 400 или 600 раз. В темном поле включения хламидий дают желто-зеленую флюоресценцию. В сомнительных случаях рекомендуется исследовать в световом микроскопе под иммерсией с объективом х 90.

Элементарные тельца хламидий имеют розовый цвет, а ретикулярные - синий цвет.


© Коллектив авторов, 1998-2013, Почтовый адрес: 195009, Санкт-Петербург, а/я 16


 

Высококачественный доступ в Интернет предоставлен ГНУ "Вузтелекомцентр" и его структурным подразделением UniTel.

  ВНИМАНИЕ:  Информация, представленная на данном сайте, не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения, и не может служить заменой очной консультации врача!